Transformation - kémiai enciklopédia
Transzformáció (lat átalakulási -. Conversion) a molekuláris genetika. öröklődő változás következik be a kommunikáció-sejtek infiltrációja idegen DNS-t.
Ennek eredményeként a átalakulása a recipiens sejtbe szerezhet és tegyük rezisztencia tulajdonság utódaiknak, általa korábban hiányzó, de rendelhető a donor sejtek (pl. Egy antibiotikum rezisztenciát).
T ransformatsiya több. baktériumok (pneumococcusok, streptococcusok, hemofília-WIDE baktériumok, bacillusok) az a természetes folyamat előforduló p. populációkban. Ugyanakkor sejteket. képes abszorbeálni és építse be a kromoszómába heterológ DNS-t. képesek t. hívott. kompetencia (készenlét), jön egy adott időszak alatt az életciklus (vége növekedési fázis). kompetenciafejlesztés mehet a „lépcsőzetes” típus: sejtekben. válnak az illetékes, elszigetelt környezetben nizkomol. fehérje (azaz. nevezzük. kompetencia faktor), k-nek adszorbeált mások. ketrecek. is teszi őket az illetékes.
az átalakulás-mechanizmus tartalmaz egy irreverzibilis abszorpciója a DNS-donor sejtek (pl. a tápközegbe szekretálódik eredményeként sejtlízis) a kötszer-sti befogadó sejtben. Jó adszorbeált DNS csak. amelynek mol. súlya nem kevesebb, mint 300 ezer. A legtöbb baktérium adszorbeálni képes DNS bármilyen eredetű. Hemofil baktériumok adszorbeált csak ilyen DNS-fragmenseket. to- szállítására jellegét. szekvenciát 11 bp. jellemző csak a baktérium DNS-ének. Fajspecifikus. Adszorpciós szintén jellemző a Neisseria gonorrhoeae. Adszorpciós végezzük spec. receptorokhoz. ahol a DNS kötődik speciális fehérjéket és „visszahúzott” a sejtben. Így az egyik a DNS-szálak megsemmisül miatt nukleáz aktivitását DNS-kötő fehérjék. és a sejt szállítjuk már egyszálú DNS-t. Ő azonnal beburkolta fehérjemolekulák. to- védi a sejt DNS exonukleázoktól, és hozzájárul annak érintkezik a kromoszómán. majd rekombináció vele. E transzformációs folyamat megszakad.
DNS-t lehet bevinni baktériumok mesterségesen. Erre a célra, pl. coliform (amelyre nincs természetes átalakulási tulajdonságai) lehűtjük, és hozzáadunk oldatok CaCI2 vagy RBCL vagy kitéve fagyasztás alacsony T-PAX majd kiolvasztottuk. A sejteket így vált átjárhatóvá a DNS-t. Azonban transzformáció mechanizmusa ebben az esetben teljesen más, mint a fentiekben ismertetettek.
A baktérium át léphet be transzformáció és a DNS-plazmidokat. A végeredmény a sejtek megjelenése. hordozó idegen plazmidként az autonóm állapotban, vagy beépül a kromoszómába. A mechanizmus a behatolás a sejt egy plazmid DNS-t ugyanaz, mint a kromoszóma. Azonban, az esemény a egyszálú DNS, és mások. Kapcsolódó folyamatok felszívódás, így a „elrontani” plazmid. a valószínűsége megfelelő rekonstrukciója a gyűrű alakú replikálódó alacsony (monomer formái sejt transzformációs plazmidok nem hatékony). Ezért, használja multimer (amely több. Plazmidokat) plazmid formájában vagy direkt ismétlődések nukleotid. Ezért lehetőség, hogy „építeni” egy teljes plazmid emelkedik.
Használata plazmid transzformációs is elvégezhetjük protoplasztok (sejtek egy távoli sejtfal), to- majd regeneráljuk a teljes sejtek. DNS-t. behatol őket, szinte nem sérült, és továbbra is a kettős szálú. A plazmid átalakulás sok tekintetben hasonló a t. Úgynevezett. transzfekcióval. amikor a baktériumok fogyasztanak DNS fágot (bakteriális vírus), előzetes kiválasztását fág részecskéket. Ez a DNS a baktérium termelését kódolja az új fág részecskék. to- elpusztítják a bakteriális sejt, majd menj ki.
T ransformatsiya élesztő m. B. végzik csak mesterséges eszközökkel. Erre a célra, protoplasztok vagy sejtek kezelt alkálifémsók. DNS behatol élesztő protoplasztokat is hatása alatt Elektromos. bit (m. nevezik. elektroporációval).
T ransformatsiya emlőssejtekben megvalósítható csak mesterségesen mikroinjektálással idegen DNS a sejtmagba az embriók, a szomatikus. sejtek vagy DNS a sejtek felveszik őket szövettenyészetben. A legtöbb esetben, a DNS-t adunk a p-RA CaCl2 és foszfát-puffer; képződött finom csapadék-nek adszorbeált és felszívódik a sejtek. Az is lehetséges, hogy a DNS bevitele egy liposzóma, vagy használja, mint a vektor-DNS-tartalmú vírus-mérsékelt jelen a felvételét a DNS-genom fragmentumokat állatok.
Növényi sejtek nem képesek elnyelni a DNS. Az átalakulás a kétszikű növényi sejtek alkalmazásával regenerálódó protoplasztokat. elnyelni a szabad DNS-t és DNS-t. liposzómákba. Regeneráló a transzformált protoplasztok formájában t. Úgynevezett. kallusz szövetet. Egy raj képződik növény. Et al. Eljárás idegen DNS bevitelére genomjába ilyen növekedés. sejtek természetes fertőzés a baktérium Agrobacterium tume-faciens, hordozó Ti- vagy Ri-plazmidot. Ez a baktérium képes áthatolni az ép emelkedik. sejtekben. majd kiürített plazmid integrálódott a genomba. Az egyszikűek ezek a plazmidok nem működnek a sejtben. átalakulásra igénybe a közvetlen DNS transzfer protoplasztokba. elektroporáció segítségével. Növényi transzformáció is végezhető segítségével „lövés” a sejtbe gyorsított részecskék volfrám vagy arany. a to- előzőleg felvitt DNS.
T ransformatsiyu használt génsebészeti módszerekkel gének juttathatók be egy cellába. hordozó előre meghatározott információkat.
T ransformatsiya fedezték fel 1928-ban F. Griffith. 1944-ben, G. Avery és munkatársai azt mutatták, hogy az átalakítás a bizonyos patogén nem patogén baktériumok végzik átvitelével egy első DNS-genom. felszabadult a sejtekből a virulens törzsek.
Irod Kozhina T. I. Zaharov I. A. "sikerei modern biológia", 1987, t. 104, c. 1 (4), p. 3-21; Prozorov A. baktériumok transzformálása, M. 1988 Sybenga J. "Theor. Appl. Genet.", 1983, v. 66, № 3-4, p. 179-201; Kucherlopati R. Skoultchi A. I. "CRC kritikus rev. Biochem.", 1984, v. 16, № 4, p. 349-79. AA Prozorov.